lunes, 10 de octubre de 2011

Caracterización molecular y susceptibilidad antimicrobiana en cepas de escherichia coli aisladas de pacientes pediátricos con diarrea.


Las enfermedades diarreicas en infantes constituyen un problema de salud en todo el mundo, especialmente en países de vía de desarrollo, como México. La organización mundial de la salud, ha estimado que las enfermedades por diarreas son las responsables de la muerte de 2.5 millones de niños en el mundo por año, con una tasa anual de mortalidad de 4.9 por cada 1000 niños y una incidencia de 3.2 episodios de diarrea por año en menores de 5 años, gracias al manejo adecuado de los pacientes, estas cifras de mortalidad han ido en decremento en los últimos años.
Detrás de las principales bacterias causantes de bacterias se encuentran Escherichia coli. Esta bacteria coloniza el intestino del hombre pocas horas después de su nacimiento, se considera de flora normal, pero existen cepas patógenas que pueden causar daño intestinal y/o extraintestinal, produciendo diferentes síndromes, entre ellos el síndrome diarreico.
Las E. coli diarrogénicas (PECD) o causantes de diarreas pueden dividirse en seis categorías distintas basadas en los mecanismos de patogenicidad  que presenta cada una de ellas: E. coli enteropatógena (EPEC), E. coli enterotoxigénica (ETEC), E. coli enteroinvasiva (EIEC), E. coli enterohemorrágica (EHEC), E. coli de adherencia difusa (DAEC) y E. coli enteroagregativa (EAEC). En mexico aun existen estudios en los que se determinan las prevalencias de deferentes patotipos, siendo ETEC y EPEC dos de los principales patógenos aislados en casos de diarreas, se ha estudiado poco la epidemiologia de E. coli enteropatogena, pese al alto riesgo que presenta para los niños menores de dos años. En el presente trabajo pretendemos identificar de forma integral los patotipos, serotipos, resistencia antimicrobiana, asi como los genes de virulencia de E. coli diarreogenicas en niñod de edad infantil y preescolar en la ciudad Mexico mediante la técnica de PCR multiplex. La identificación de estos genes de virulencia, predominantes en cepas de E. coli que afectan a niños menores de cinco años, nos permitirá desarrollar un método diagnostico molecular que contribuye al diagnóstico rápido y certero de esta enfermedad, permitiendo un mejor manejo, tratamiento, control y prevención de las infecciones por esta bacteria.
OBJETIVOS
Objetivo general.
Determinar la prevalecencia de los diferentes patotipos de E. coli asociados a diarreas en población de niños de edad infantil y preescolar, asi como la sensibilidad der estas cepas a diferentes agentes antimicrobianos.
Objetivos particulares.
Identificar mediante una técnica de alta sensibilidad y especificidad, como la reacción en cadena de la polimerasa (OCR) multiplex, los principales genes de virulencia asociados a cepas de E. coli enterotoxigenicas (ETEC), E. coli enteropatogenicas típica (tEPEC), E. coli enteropatógenicas atípica (aPEC), E. coli enteroinvasivas (EIEC), y E. coli enterohemorrágica (EHEC) productoras de toxina Shiga, en muestras de heces diarreicas, provenientes de niños en edad infantil y preescolar, del INP.
Identificar mediante ensayos en líneas celulares HEp-2 in vitro, los principales tipos de adherencia bacteriana que presentan los patotipos EPEC y EAEC.
Identificar los serotipos de E. coli diarreogénicas asociados a diarreas en muestra de heces provenientes de niños en edad infantil y preescolar con diarrea.
Determinar la sensibilidad a diferentes agentes antimicrobianos, asi como la determinación de la concentración minima inhibitoria para cada uno de los aislados de E. coli obtenidos.
Desarrollar una prueba de detección rápida y especifica que nos permita identificar marcadores epidemiológicos de patogenicidad.
RESULTADOS PRELIMINARES
33 muestra de heces han sido colectadas provenientes del Hospital General de Mexico.
89 muestras de E. coli provenientes del Instituto Nacional de Pediatria  
Rango de edades: 3d a 5 a 7 m.
En total contamos con 172 muestras de ADN
Hemolíticas: 20
Criterios para clasificación de virotipos:
tEPEC: espresen gene eae + fbpA.
aEPEC : espresen gen eae
ETEC:  espresen gen eae ST y/o LT
EIEC: espresen gen ial
STEC: esperen gen ST x 1 y/0 STx2 /algunas cepas eae)
Se han realizado ensayos de antibiograma a 172 muestras.

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